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显微荧光光谱是荧光分析定性和定量的基础
点击次数:571 发布时间:2018/12/17 17:21:36

    显微荧光光谱能够提供激发谱、发射谱、峰位、峰强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振度等信息,是荧光分析定性和定量的基础。  
显微荧光光谱的特点:  
    1、Stokes位移:激发与发射之间存在着一定的能量损失,荧光发射波长总是大于激发波长,λem>λex;  
    2、荧光发射光谱的形状与激发波长无关,荧光发射是激发态的分子由第一激发单重态的振动能级跃迁回基态的各振动能级所产生的,因此,不管激发光能量多大,显微荧光光谱只有一个发射带,且发射光谱的形状与激发波长无关。  
    3、荧光激发发光谱与吸收光谱的形状相近似,荧光发射光谱与吸收光谱成镜像关系。  
    任何荧光化合物都具有两个特征光谱:激发光谱和发射光谱。激发光谱反映了某一固定的发射波长下所测量的荧光强度对激发波长的依赖关系;发射光谱反映了某一固定激发波长下所测量的荧光的波长分布。  
    通过测量荧光(或磷光)体的发光通量(即强度)随激发光波长的变化而获得的光谱,称为激发光谱。通过扫描激发单色器,使不同波长的入射光照射激发荧光(磷光)体,发出的荧光(磷光)通过固定波长的发射单色器而照射到检测器上,检测其荧光(磷光)强度,通过记录仪记录光强度对激发光波长的关系曲线,即为激发光谱。通过激发光谱,选择激发波长——发射荧光(磷光)强度的激发光波长,常用λex表示。  
    通过测量荧光(或磷光)体的发光通量(强度)随发射光波长的变化而获得的光谱,称为发射光谱。固定激发光的波长,扫描发射光的波长,记录发射光强度对发射光波长的关系曲线,即为发射光谱。通过发射光谱选择的发射波长——发射荧光(磷光)强度的发射波长,常用λem表示。磷光发射波长比荧光来得长。